Beberapa enzim yang biasa digunakan dalam percobaan PCR

Reaksi berantai polimerase, disingkatPCRdalam bahasa Inggris, adalah teknik biologi molekuler yang digunakan untuk memperkuat fragmen DNA tertentu.Ini dapat dianggap sebagai replikasi DNA khusus di luar tubuh, yang dapat meningkatkan jumlah DNA dalam jumlah yang sangat kecil.Selama keseluruhanPCRproses reaksi, satu kelas zat memainkan peran penting – enzim.

1. DNA Taq

Dalam percobaan di masa-masa awalPCR, para ilmuwan menggunakan DNA polimerase I Escherichia coli, Namun ada masalah dengan enzim ini: enzim ini perlu mengisi kembali enzim baru setiap kali siklus dilakukan, yang membuat langkah-langkah operasinya sedikit rumit dan sulit untuk diperkuat secara otomatis sepenuhnya.Masalah ini terpecahkan setelah para ilmuwan secara tidak sengaja mengisolasi DNA polimerase Taq dari Thermus Aquaticus pada tahun 1988. Sejak itu, amplifikasi DNA otomatis menjadi kenyataan.Penemuan enzim ini juga menjadikannyaPCRteknologi teknologi yang nyaman, praktis dan universal.Saat ini, Taq DNA polimerase adalah polimerase yang paling umum dalam kit DNA.

2.PfuDNA

Seperti disebutkan di atas, Taq DNase memiliki bug yang besar, sehingga para ilmuwan telah memodifikasi DNA polimerase Taq sampai batas tertentu untuk menghindari amplifikasi non-spesifik karena ketidakcocokan, yang mengakibatkan hasil pengujian tidak akurat.Namun modifikasi DNA polimerase Taq dapat menghambat aktivitas DNA polimerase pada suhu kamar.PfuDNA polimerase dapat menutupi kekurangan Taq DNA polimerase di atas, sehingga reaksi PCR dapat berjalan normal, dan tingkat keberhasilan amplifikasi gen target dapat ditingkatkan secara efektif.

3. Membalikkan Transkriptase

Transkriptase balik ditemukan pada tahun 1970. Enzim ini menggunakan RNA sebagai templat, dNTP sebagai substrat, mengikuti prinsip pemasangan basa, dan mensintesis untai tunggal DNA yang melengkapi templat RNA dalam arah 5′-3′.Transkriptase balik terutama bergantung pada aktivitas DNA polimerase dari cetakan DNA atau RNA dan oleh karena itu tidak memiliki aktivitas eksonuklease 3′-5′.Namun, ia memiliki aktivitas RNase H, yang membatasi panjang sintesis transkriptase balik sampai batas tertentu.Karena rendahnya fidelitas dan termostabilitas transkriptase balik liar, para ilmuwan juga memodifikasinya.

UntukPCRpercobaan, bahan habis pakai utama adalah: tabung PCR individu, tabung PCR 4/8-strip, pelat PCR.

milik Labiobahan habis pakai PCRmemiliki yang berikut inikeuntungan:

pelat PCR: Kompatibilitas pengendara sepeda termal yang luas;Kontras tinggi, identifikasi sumur mudah;refleksi fluoresensi yang baik; bagusperpindahan panas;Bersertifikat DNase, RNase, DNA, inhibitor PCR, dan teruji bebas pirogen.

Tabung PCR individu: Tahan penguapan; bagusperpindahan panas;kejernihan optik yang sangat baik; DNase, RNase, DNA, inhibitor PCR bersertifikat, dan teruji bebas pirogen.

tabung PCR 4/8-strip: Dinding ultra-tipis; kejernihan tinggi; refleksi fluoresensi yang baik;dapat digunakan dalam industri farmasi, industri makanan, dan biologi molekuler; bahan PP murni berkualitas tinggi; DNase, RNase, DNA, inhibitor PCR bersertifikat, dan teruji bebas pirogen.